обяснено
Разтворим протеин означава, че състоянието на малка молекула може да бъде водоразтворими протеини или други разтворители. Често се използва като важен индикатор във физиологията на растенията, микробиологията, обработката на храни и други експерименти. Разтворимият протеин е един от важните показатели за устойчивост на суша на растенията.
тестово измерване-250 G Метод Brilliant Blue принципи
Coomassie Brilliant Blue G-250 (GooMAssIe BRILLIAnT Blue G-250) Определяне на съдържанието на протеин, принадлежащ на закон за свързване на багрилото. Coomassie Brilliant Blue G-250 в свободно състояние беше червен, в разреден киселинен разтвор, когато се комбинира с хидрофобната област на протеина, става син, първото максимално поглъщане на 465 nm светлина, второто 595 nM. Концентрациите на протеин в определен диапазон (1 ~ 100 μg), пигмент-свързващият протеин е пропорционален на абсорбцията на светлина при дължина на вълната от 595 nM и съдържанието на протеин, може да се използва за количествено определяне на протеини. Протеин с Coomassie Brilliant Blue G-250, свързващ се в около 2-минутно равновесие, реакцията завършва много бързо, стабилна при 1H комбинации от тях при стайна температура. Реакцията е бърза и чувствителна (чувствителност още четири пъти по-висока от метода FolIn-phenol), лесна за работа, по-малко смущаващо вещество (Coomassie brilliant blue G-250 и протеин, свързан от ван дер Ваалсови сили, по-малко повлиян от специфичния протеин, в в допълнение към външните хистони, различни други видове малка разлика в интензитета на оцветяване на протеин), може да се определи съдържанието на протеин в микрограм, протеинът е по-добър количествен метод. Въпреки това, този метод има и своите недостатъци, Coomassie brilliant blue при високо линейно ниско съдържание на протеини и различните източници на протеин и условията за свързване на пигмента са различни.
инструменти и уреди
721 спектрофотометър; 10 ml цилиндър 1; хоросан; чаша; колба; пипета :? 1Ml 3 разклонен, 0 1Ml 3 разклонен; 10 ml запушена градуирана епруветка 14.
реагент
стандартен протеинов разтвор: Говежди серумен албумин, формулиран със 100 μg / Ml стандартен протеинов разтвор, съдържащ протеина;
90% етанол;
85% фосфорна киселина (W/V);
Разтвор на Coomassie brilliant blue G-250: Претеглят се 100 μg Coomassie brilliant blue G-250, се разтваря в 50 ml 90% етанол, 85% 100 ml фосфорна киселина и накрая с дестилирана вода до 1000 ml, съхранението е в кафява бутилка, разтворът може да бъде на стайна температура в продължение на 1 месец.
Операция
1? Стандартна крива (съдържание на протеин от 0 ~ 100 μg / Ml) 6 взета епруветка със запушалка, приготвена съгласно данни от Таблица 2-1, съдържаща 0 ~ 100 μg / Ml разтвор на говежди серумен протеин всеки 1 Ml.
Таблица 2-1 различно протеиново съдържание на говежди серумен протеин е формулирано в табл
123456 стандартен разтвор на протеин за тръба (ml) 00.200.400.600.801.00 дестилирана вода (ml) 1.000.800.600. 400.200 протеиново съдържание (μg) 020406080100 5Ml след добавяне на разтвор на Coomassie brilliant blue G-250, запушен, обърнат няколко пъти за смесване, поставен за 2 минути, с кювета за светлинен път 1CM цвят при 595nM във всяка епруветка. Концентрацията на протеин по абсцисата и ординатата е стандартна крива на абсорбция.
2. Определяне на концентрацията на протеин в екстракта от пробата. Изтеглете 1,0 mL екстракт от пробата (вижте метода за екстракция на пробата LoWry), поставен в затворена епруветка (в два екземпляра за всеки набор от проби), добавете 5 Ml тестов разтвор на брилянтно синьо G-250, смесени добре, след поставяне на 2 минути оцветяване при 595 nm, записване на абсорбцията и стандартната крива, получена от съдържанието на протеин.
3. Изчислени резултати
в съдържанието на протеин в пробата (Mg / g) = (C × VT) / (V1 × FW × 1000) (2-2)
където C: проверете стойностите на стандартната крива (μg); VT: извличане на общия обем течност (Ml);
FW: прясно тегло на пробата (g); V1: измерено количество на пробата ( ml).