Domov Technika Rozpustný protein

Rozpustný protein



vysvětleno

Rozpustný protein znamená, že stavem malé molekuly mohou být ve vodě rozpustné proteiny nebo jiná rozpouštědla. Často se používá jako důležitý indikátor ve fyziologii rostlin, mikrobiologii, zpracování potravin a dalších experimentech. Rozpustný protein je jedním z důležitých ukazatelů odolnosti rostlin vůči suchu.

zkušební měření-250 G Metoda Brilliant Blue

principy

Coomassie Brilliant Blue G-250 (GooMAssIe Brilliant Blue G-250) Stanovení obsahu bílkovin podle zákona o vazbě barviv. Coomassie Brilliant Blue G-250 ve volném stavu byla červená, ve zředěném kyselém roztoku, když je kombinována s hydrofobní oblastí proteinu, zmodrá, první maximální absorpce světla 465 nm, druhá 595 nM. Koncentrace proteinu v určitém rozmezí (1 ~ 100 μg), protein vázající pigment byl úměrný absorpci světla při vlnové délce 595 nM a obsahu proteinu, lze jej použít pro kvantitativní stanovení proteinů. Protein s vazbou Coomassie Brilliant Blue G-250 v přibližně 2minutové rovnováze, reakce je dokončena velmi rychle, stabilní po jejich kombinacích 1H při teplotě místnosti. Reakce je rychlá a citlivá (citlivost dále čtyřikrát vyšší než u metody FolInfenol), snadno ovladatelná, méně interferující látky (Coomassie brilantní modř G-250 a protein vázaný van der Waalsovými silami, méně ovlivněný specifickým proteinem, v Kromě histonů vnější , různé jiné typy malý rozdíl v intenzitě barvení proteinů), lze určit obsah mikrogramů proteinu, protein je lepší kvantitativní metoda. Tato metoda má však i své nevýhody, Coomassie brilantní modř při vysokém lineárním nízkém obsahu bílkovin a různé zdroje bílkovin a podmínky vázání pigmentu jsou různé.

přístroje a zařízení

721 spektrofotometr; 10 ml válec 1; minomet; kádinka; baňka; pipeta:? 1Ml 3 rozvětvený, 0 1Ml 3 rozvětvený; 10 ml zazátkovaná odměrná zkumavka 14.

činidlo

standardní proteinový roztok: Hovězí sérový albumin formulovaný se 100 μg / ml standardního proteinového roztoku obsahujícího protein;

90% ethanol;

85% kyselina fosforečná (hmotn./obj.);

Roztok Coomassie brilantní modř G-250: Navažte 100 μg Coomassie brilantní modř G-250, byl rozpuštěn v 50 ml 90% ethanolu, 85% 100 ml kyseliny fosforečné a nakonec s destilovanou vodou na 1000 ml, skladováno v hnědé lahvičce, roztok může mít pokojovou teplotu po dobu 1 měsíce.

Operace

1? Standardní křivka (obsah proteinu 0 ~ 100 μg / Ml) 6 odebraná uzavřená zkumavka, připravená podle údajů v tabulce 2-1 obsahující 0 ~ 100 μg / ml roztoku proteinu hovězího séra, každý 1 ml.

Tabulka 2-1 různý obsah proteinu v proteinu hovězího séra byl formulován v tabulce

123456 standardní roztok proteinu potrubí (ml) 00,200,400,600,801,00 destilovaná voda (ml) 1,000,800,600. 400,200 obsah proteinu (μg) 020406080100 5 ml po přidání roztoku Coomassie brilantní modř G-250, zazátkováno, několikrát převráceno, aby se promíchalo, umístěno na 2 minuty, s kyvetou světelné dráhy 1CM barva v 595 nM v každé zkumavce. Koncentrace proteinu na vodorovné ose a na ose y je standardní křivka absorbance.

2. Stanovení koncentrace proteinu v extraktu vzorku Odeberte 1,0 ml extraktu ze vzorku (viz metoda extrakce vzorku LoWry), umístíte do zazátkované zkumavky (dvakrát pro každou sadu vzorků), přidáte 5 ml testovacího roztoku brilantní modři G-250, dobře promíchejte, po umístění 2 minuty barvy na 595 nm, zaznamenejte absorbanci a standardní křivku získanou obsahem proteinu.

3. Výsledky byly vypočteny

v obsahu bílkovin ve vzorku (Mg / g) = (C × VT) / (V1 × FW × 1000) (2-2)

kde C: kontrola hodnot standardní křivky (μg); VT: extrakce celkového objemu kapaliny (Ml);

FW: čerstvá hmotnost vzorku (g); V1: množství naměřeného vzorku (ml).

Tento článek je ze sítě, nereprezentuje pozici této stanice. Uveďte prosím původ dotisku
HORNÍ