vysvětleno
Rozpustný protein znamená, že stavem malé molekuly mohou být ve vodě rozpustné proteiny nebo jiná rozpouštědla. Často se používá jako důležitý indikátor ve fyziologii rostlin, mikrobiologii, zpracování potravin a dalších experimentech. Rozpustný protein je jedním z důležitých ukazatelů odolnosti rostlin vůči suchu.
zkušební měření-250 G Metoda Brilliant Blue principy
Coomassie Brilliant Blue G-250 (GooMAssIe Brilliant Blue G-250) Stanovení obsahu bílkovin podle zákona o vazbě barviv. Coomassie Brilliant Blue G-250 ve volném stavu byla červená, ve zředěném kyselém roztoku, když je kombinována s hydrofobní oblastí proteinu, zmodrá, první maximální absorpce světla 465 nm, druhá 595 nM. Koncentrace proteinu v určitém rozmezí (1 ~ 100 μg), protein vázající pigment byl úměrný absorpci světla při vlnové délce 595 nM a obsahu proteinu, lze jej použít pro kvantitativní stanovení proteinů. Protein s vazbou Coomassie Brilliant Blue G-250 v přibližně 2minutové rovnováze, reakce je dokončena velmi rychle, stabilní po jejich kombinacích 1H při teplotě místnosti. Reakce je rychlá a citlivá (citlivost dále čtyřikrát vyšší než u metody FolInfenol), snadno ovladatelná, méně interferující látky (Coomassie brilantní modř G-250 a protein vázaný van der Waalsovými silami, méně ovlivněný specifickým proteinem, v Kromě histonů vnější , různé jiné typy malý rozdíl v intenzitě barvení proteinů), lze určit obsah mikrogramů proteinu, protein je lepší kvantitativní metoda. Tato metoda má však i své nevýhody, Coomassie brilantní modř při vysokém lineárním nízkém obsahu bílkovin a různé zdroje bílkovin a podmínky vázání pigmentu jsou různé.
přístroje a zařízení
721 spektrofotometr; 10 ml válec 1; minomet; kádinka; baňka; pipeta:? 1Ml 3 rozvětvený, 0 1Ml 3 rozvětvený; 10 ml zazátkovaná odměrná zkumavka 14.
činidlo
standardní proteinový roztok: Hovězí sérový albumin formulovaný se 100 μg / ml standardního proteinového roztoku obsahujícího protein;
90% ethanol;
85% kyselina fosforečná (hmotn./obj.);
Roztok Coomassie brilantní modř G-250: Navažte 100 μg Coomassie brilantní modř G-250, byl rozpuštěn v 50 ml 90% ethanolu, 85% 100 ml kyseliny fosforečné a nakonec s destilovanou vodou na 1000 ml, skladováno v hnědé lahvičce, roztok může mít pokojovou teplotu po dobu 1 měsíce.
Operace
1? Standardní křivka (obsah proteinu 0 ~ 100 μg / Ml) 6 odebraná uzavřená zkumavka, připravená podle údajů v tabulce 2-1 obsahující 0 ~ 100 μg / ml roztoku proteinu hovězího séra, každý 1 ml.
Tabulka 2-1 různý obsah proteinu v proteinu hovězího séra byl formulován v tabulce
123456 standardní roztok proteinu potrubí (ml) 00,200,400,600,801,00 destilovaná voda (ml) 1,000,800,600. 400,200 obsah proteinu (μg) 020406080100 5 ml po přidání roztoku Coomassie brilantní modř G-250, zazátkováno, několikrát převráceno, aby se promíchalo, umístěno na 2 minuty, s kyvetou světelné dráhy 1CM barva v 595 nM v každé zkumavce. Koncentrace proteinu na vodorovné ose a na ose y je standardní křivka absorbance.
2. Stanovení koncentrace proteinu v extraktu vzorku Odeberte 1,0 ml extraktu ze vzorku (viz metoda extrakce vzorku LoWry), umístíte do zazátkované zkumavky (dvakrát pro každou sadu vzorků), přidáte 5 ml testovacího roztoku brilantní modři G-250, dobře promíchejte, po umístění 2 minuty barvy na 595 nm, zaznamenejte absorbanci a standardní křivku získanou obsahem proteinu.
3. Výsledky byly vypočteny
v obsahu bílkovin ve vzorku (Mg / g) = (C × VT) / (V1 × FW × 1000) (2-2)
kde C: kontrola hodnot standardní křivky (μg); VT: extrakce celkového objemu kapaliny (Ml);
FW: čerstvá hmotnost vzorku (g); V1: množství naměřeného vzorku (ml).