selitetty
Liukoinen proteiini tarkoittaa, että pieni molekyyli voi olla vesiliukoisia proteiineja tai muita liuottimia. Käytetään usein tärkeänä indikaattorina kasvien fysiologiassa, mikrobiologiassa, elintarvikejalostuksessa ja muissa kokeissa. Liukoinen proteiini on yksi tärkeimmistä kasvien kuivuudenkestävyyden indikaattoreista.
testimittaus-250 G Menetelmä Brilliant Blue periaatteet
Coomassie Brilliant Blue G-250 (GooMASsie Brilliant Blue G-250) Lakiin kuuluvan värisitoutumisen proteiinipitoisuuden määrittäminen. Coomassie Brilliant Blue G-250 oli vapaassa tilassa punainen, laimeassa happoliuoksessa, kun se yhdistetään proteiinin hydrofobiseen alueeseen, muuttuu siniseksi, entinen maksimiabsorptio 465 nm valoa, jälkimmäinen 595 nM. Proteiinipitoisuudet tietyllä alueella (1 ~ 100 μg), pigmenttiä sitova proteiini oli verrannollinen valon absorptioon aallonpituudella 595 nM ja proteiinipitoisuuteen, sitä voidaan käyttää proteiinien kvantitatiiviseen määritykseen. Proteiini, jossa Coomassie Brilliant Blue G-250 sitoutuu noin 2 minuutin tasapainossa, reaktio päättyy hyvin nopeasti, stabiili yli 1 H yhdistelmien huoneenlämpötilassa. Reaktio on nopea ja herkkä (herkkyys vielä neljä kertaa korkeampi kuin FolIn-fenolimenetelmä), helppokäyttöinen, vähemmän häiritsevää ainetta (Coomassie briljanttisininen G-250 ja van der Waalsin voimien sitoma proteiini, johon spesifinen proteiini vaikuttaa vähemmän). lisäksi histonit ulompi , erilaisia muita vähän proteiinin värjäytymisen intensiteetin ero), voidaan määrittää mikrogramma proteiinipitoisuus, proteiini on parempi kvantitatiivinen menetelmä. Tällä menetelmällä on kuitenkin myös haittapuolensa, Coomassie briljanttisininen korkealla lineaarisesti alhaisella proteiinipitoisuudella ja erilaiset proteiinilähteet ja pigmentin sitomisolosuhteet ovat erilaisia.
instrumentit ja laitteet
721 spektrofotometri; 10 ml:n sylinteri 1; laasti; dekantterilasi; pullo; pipetti:? 1 ml 3 haarautunutta, 0 1 ml 3 haarautunutta; 10 ml:n tulpalla varustettu asteikolla varustettu koeputki 14.
reagenssi
standardiproteiiniliuos: Naudan seerumialbumiini, joka on formuloitu 100 µg/ml standardiproteiiniliuoksella, joka sisältää proteiinin;
90 % etanolia;
85 % fosforihappoa (paino/tilavuus);
Coomassie briljantinsininen G-250-liuos: Punnitaan 100 μg Coomassie briljantinsinistä G-250, liuotettiin 50 ml:aan 90 % etanolia, 85 % 100 ml fosforihappoon ja lopuksi tislatulla vedellä 1000 ml:aan, säilytys on ruskeassa pullossa liuos voi olla huoneenlämmössä 1 kuukauden ajan.
Operaatio
1? Standardikäyrä (proteiinipitoisuus 0 - 100 μg / Ml) 6 otettu tulpalla varustettu koeputki, valmistettu taulukon 2-1 mukaisesti sisältäen 0 - 100 μg / Ml naudan seerumiproteiiniliuosta 1 ml.
Taulukko 2-1 erilainen naudan seerumiproteiinin proteiinipitoisuus formuloitiin taulukkoon
123456 putkiproteiinin standardiliuos (ml) 00.200.400.600.801.00 tislattu vesi (ml) 1.000.800.600. 400 200 proteiinipitoisuus (μg) 020406080100 5Ml Coomassie briljantinsinisen G-250-liuoksen lisäämisen jälkeen, tulpalla, käännettynä useita kertoja sekoittumista varten, sijoitetaan 2 minuuttiin, valopolkukyvetti 1cm värillä 595nM jokaisessa putkessa. Abskissan ja ordinaatan proteiinipitoisuus on absorbanssin standardikäyrä.
2. Proteiinipitoisuuden määrittäminen näyteuutteesta. Ota 1,0 ml näyteuutetta (katso LoWry-näytteen uuttomenetelmä), joka laitetaan tulpalla varustettuun koeputkeen (kaksoiskappale jokaiselle näytesarjalle), lisättiin 5 ml briljanttisinistä G-250 testiliuosta, sekoitettiin hyvin sen jälkeen, kun 2Min väri on asetettu 595 nm:iin, kirjattiin absorbanssi ja proteiinipitoisuudesta saatu standardikäyrä.
3. Tulokset laskettu
näytteen proteiinipitoisuudessa (Mg / g) = (C × VT) / (V1 × FW × 1000) (2-2)
missä C: tarkista standardikäyrän arvot (μg); VT: nesteen kokonaistilavuuden (Ml) uuttaminen;
FW: näytteen tuorepaino (g); V1: mitattu näytteen määrä ( ml).